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配制PBS磷酸鹽緩沖液的具體步驟

更新時間:2024-12-02瀏覽:460次

  配制PBS磷酸鹽緩沖液的具體步驟如下:
 
  一、準(zhǔn)備材料與設(shè)備
 
  材料:
 
  NaCl(氯化鈉)
 
  KCl
 
  Na2HPO4(磷酸氫二鈉,注意根據(jù)結(jié)晶水的不同選擇適當(dāng)重量)
 
  KH2PO4(磷酸二氫鉀)
 
  去離子水
 
  設(shè)備:
 
  磁力攪拌器
 
  燒杯(至少兩個,一個用于溶解,一個用于定容)
 
  轉(zhuǎn)子
 
  量筒(用于精確測量液體體積)
 
  微波爐或水浴鍋(用于加熱去離子水)
 
  稱量天平
 
  pH計(可選,用于精確調(diào)整pH值)
 
  0.22微米濾器(用于無菌過濾,可選)
 
  二、配制步驟
 
  清洗與準(zhǔn)備:
 
  清洗干凈所有將要用到的燒杯、轉(zhuǎn)子和量筒,確保無雜質(zhì)殘留。
 
  預(yù)熱與溶解:
 
  向一個燒杯中加入約100ml去離子水,并放入轉(zhuǎn)子備用。
 
  另取一個燒杯,加入約800ml去離子水,置于微波爐或水浴鍋中加熱至65°C以上,以加速溶解過程。
 
  配制母液:
 
  將加熱后的去離子水倒入裝有轉(zhuǎn)子的燒杯中,置于磁力攪拌器上。
 
  按照配方準(zhǔn)確稱取NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4,依次加入燒杯中。
 
  攪拌至溶解。
 
  定容:
 
  用量筒定容至1L,得到10X的PBS母液。
 
  稀釋與調(diào)整pH:
 
  取100ml 10X的PBS母液,加入900ml去離子水,混合均勻。
 
  此時得到的PBS緩沖液pH值通常接近7.4,無需額外調(diào)整。若需精確控制pH值,可使用pH計進(jìn)行檢測,并通過添加少量酸或堿溶液進(jìn)行調(diào)整,確保pH值在7.2~7.4之間。
 
  過濾與保存(可選):
 
  使用0.22微米濾器對配制好的PBS緩沖液進(jìn)行過濾,以去除可能存在的細(xì)菌和其他微生物。
 
  過濾后,將緩沖液分裝至無菌容器中,避免陽光直射和高溫環(huán)境,于適宜條件下保存?zhèn)溆谩?br /> 
  三、注意事項
 
  精確稱量:各種成分的比例對緩沖液的pH值和離子強(qiáng)度有直接影響,因此必須準(zhǔn)確稱量每種成分。
 
  充分溶解:在加入成分后,應(yīng)確保充分?jǐn)嚢柚寥芙猓苊庑纬沙恋砘驊腋∥铩?br /> 
  定容準(zhǔn)確:定容時,應(yīng)使用精確的量筒,并確保液體體積達(dá)到預(yù)定值。
 
  無菌操作:在配制和過濾過程中,應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范,避免污染。如需無菌的PBS磷酸鹽緩沖液,則必須進(jìn)行過濾除菌處理。
 
  儲存條件:PBS緩沖液應(yīng)儲存在陰涼、干燥、通風(fēng)良好的地方,避免陽光直射和高溫環(huán)境。在無菌條件下,PBS緩沖液的保質(zhì)期通常較長,但具體保質(zhì)期取決于儲存條件和緩沖液的成分。

 

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